微量移液器是一種移取微量液體的新型實(shí)驗(yàn)工具,是進(jìn)行生化實(shí)驗(yàn)、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的必備工具。移液器為量出式量器,分定量移液器和可調(diào)移液器兩大類。其型式分為單頭型和多頭型。微量移液器主要包括手動(dòng)移液器和電子移液器兩種。微量移液器的容量規(guī)格范圍為0.1uL~5mL,滿足液體的精確取樣和轉(zhuǎn)移的需要。
世界上第一只活塞微升移液器是 Eppendorf公司于1958年發(fā)明的,1960年獲得該發(fā)明的專利權(quán)。該公司擁有各種規(guī)格的、品牌最齊全的微量移液器。目前,國(guó)內(nèi)外生產(chǎn)的微量移液器品牌眾多,并根據(jù)不同的使用功能開發(fā)出不同用途的產(chǎn)品,例如整支可消毒的移液器、半支可消毒的移液器、電動(dòng)移液器、PCR專用移液器、大容量移液器和電子連續(xù)移液器等、微量移液器的操作使用。
移液器操作及注意事項(xiàng)
(一)設(shè)定取液值
移液器為活塞式吸管,以活塞在活塞套內(nèi)移動(dòng)的距離確定移液器的容量,利用空氣排放的原理進(jìn)行工作。移液器的容量即移液量,在移液器把柄的顯示窗上可清楚顯示。
轉(zhuǎn)動(dòng)移液器的調(diào)節(jié)旋鈕可進(jìn)行移液量的設(shè)定:反時(shí)針方向轉(zhuǎn)動(dòng)旋鈕,可提高取液量;順時(shí)針方向轉(zhuǎn)動(dòng)旋鈕,可降低取液量。調(diào)整旋鈕時(shí)不要用力過猛,還應(yīng)注意移液器顯示的數(shù)值不應(yīng)超過其可調(diào)范圍。
(二)吸液
(1)選擇吸頭放在移液器套筒上,稍加壓力使其與套筒之間無空氣間隙。
(2)把按鈕壓至第一停點(diǎn)【見圖2a)】,垂直握持加樣器,使吸頭浸入液面下3mm~5mm處,然后緩慢平穩(wěn)地松開按鈕,吸入液體[見圖2-2b)]。等待1s~2s后從液體中取出。
（三)放液
(1)將吸頭口貼到容器內(nèi)壁底部并保持傾斜,平穩(wěn)地把按鈕壓到第一停點(diǎn)[見圖2-2e)],等待1s~2s再把按鈕壓到第二停點(diǎn)以排出剩余液體[見圖2-2d)]
(2)壓住按鈕,同時(shí)提起加樣器,使吸頭貼容器壁擦過[見圖2-2d]。松開按鈕[見圖2-2e)],按吸頭彈射器除去吸頭。
(四)微量移液器的操作注意事項(xiàng)
(1)勿將微量移液器本體浸入溶液中。
(2)如吸取黏度高的試液,可先將微量移液器頭尖端以刀片或剪刀將出口切大,并先行預(yù)潤(rùn)后再吸取。
(3)吸取酸液或具腐蝕性溶液后,將微量移液器拆解開,各部位零件以蒸餾水沖洗干凈,擦干后再正確組合回復(fù)原狀。
(4)微量移液器的任何部分切勿用火燒烤,也不可吸取溫度高于70℃的溶液,避免蒸氣侵入后腐蝕活塞。
(5)套有微量移液器頭的微量移液器,無論微量移液器頭中是否有溶液,均不可平放,需直立架好。
(6)若不小心使溶液進(jìn)入吸管柱內(nèi)時(shí),應(yīng)盡快予以拆解,將活塞組件、吸管柱、O型圈、鐵氟龍墊等各部位以清水沖洗干凈后,再以酒精擦拭,擦干后再正確組合回復(fù)原狀。
微量移液器的性能校驗(yàn)
(一)氣密性檢測(cè)
移液器吸滿液體后,手持垂直放置15s,檢查吸嘴的尖頭有無液滴,如有,則說明漏氣。
(二)準(zhǔn)確性檢測(cè)
1.量程小于1uL,建議使用分光光度法檢測(cè)。將移液器調(diào)至目標(biāo)體積,然后移取染料溶液,加入一定體積的蒸餾水中,測(cè)定溶液的稀釋度(334nm或340nm),重復(fù)幾次移液操作,計(jì)算移液器的精確度。
2.量程大于1uL,可以用稱重法檢測(cè)。通過對(duì)水的稱重,轉(zhuǎn)換成體積(體積=質(zhì)量/密度),鑒別移液器的準(zhǔn)確性。由水的密度是隨著溫度交化而變化,且稱量天平本身精確度不符合檢測(cè)要求,檢測(cè)又大多在一個(gè)開放式空間操作,偏差在所難免。因面,此種稱量只能現(xiàn)場(chǎng)粗略地判斷移液器的確性進(jìn)一步的校準(zhǔn)必須在專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室操作進(jìn)行。
注意：稱重法實(shí)驗(yàn)室必備條件是高度靈做的分析天平(定期校準(zhǔn))、雙蒸水和稱量容器。水、移液器和吸嘴必須具有相同的溫度(20℃時(shí)水的密度為0.0982g/cm3)。
(三)專業(yè)校準(zhǔn)
移液器經(jīng)過長(zhǎng)期使用,彈簧的彈力會(huì)發(fā)生變形,加之本身又是塑料材質(zhì)不耐磨擦,因而就會(huì)產(chǎn)生誤差。為了保證移液器傳遞液體量的準(zhǔn)確性,必須對(duì)移液器進(jìn)行定期校準(zhǔn)。為了更好地發(fā)揮該類計(jì)量?jī)x器的作用,對(duì)新購(gòu)進(jìn)的儀器要進(jìn)行校準(zhǔn)后才能使用:對(duì)正在使用的計(jì)量?jī)x器,由于長(zhǎng)期使用會(huì)造成示值與度量對(duì)象的誤差,這種誤差若不及時(shí)校正,必定會(huì)影響測(cè)試和科研工作,因此,對(duì)使用的移液器要定期檢定、校正,并建立檔案,只有這樣才能使移液器在日常工作中更好的發(fā)揮作用。
目前,在許多實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行的常規(guī)檢測(cè)并不能完全取代專業(yè)的校準(zhǔn)工作,因?yàn)樾?zhǔn)對(duì)于外部環(huán)境、工作條件及使用的精密儀器具有較高的技術(shù)要求,而這些條件往往是大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室無法提供的?，F(xiàn)在一些大型的移液器制造商均采用全球統(tǒng)一的移液器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范,通過計(jì)算機(jī)對(duì)分析天平的測(cè)量,數(shù)據(jù)采集、計(jì)算、結(jié)果評(píng)價(jià)等環(huán)節(jié)進(jìn)行在線控制,即利用專業(yè)軟件校正控制系統(tǒng)完成。也就是說所有的人為操作都被計(jì)算機(jī)記錄并隨報(bào)告打印出來,而電腦對(duì)數(shù)據(jù)的評(píng)估認(rèn)證也是在同期進(jìn)行并完成的,完全排除了人為操縱校準(zhǔn)結(jié)果的可能性。
（四)微量移液器的標(biāo)定
合格的移液器在使用一段時(shí)間后,由于敲打、磨損或液體吸入吸管柱內(nèi)等原因均有可能導(dǎo)致其精確度下降,因此需進(jìn)行標(biāo)定。移液器1年至少標(biāo)定1次。蒸餾水稱量法標(biāo)定移液器則是常用的方法。
1.標(biāo)定條件
室溫(20℃士5℃);蒸餾水水溫與室溫溫差不得大于2℃。
2.步驟
(1)將移液器調(diào)至擬定校準(zhǔn)體積,選擇合適的吸頭。
(2)根據(jù)核查點(diǎn)選擇天平,見表2-1。
(3)將稱量杯放入天平中,待天平顯示穩(wěn)定后,調(diào)零。
(4)來回吸吹蒸餾水3次,使吸頭濕潤(rùn),用紗布拭干吸頭。
(5)垂直握住移液器,將吸頭浸入液面2mm~3mm處,緩慢地吸取蒸餾水。
(6)將吸頭離開液面,去掉外部的液體。以30°放入稱量杯中,緩慢地將移液器壓到第1擋,等待1s~3s,再壓到第2擋,使吸頭里的液體完全排出。
(7)記錄稱量值。
(8)擦干吸頭表面。
(9)重復(fù)3次移取及稱量,取平均值計(jì)算移液器的容量允許誤差及重復(fù)性。
(10)多量程移液器應(yīng)根據(jù)實(shí)際量程進(jìn)行3點(diǎn)核查。
(11)填寫和保存校準(zhǔn)記錄。
3.計(jì)算方法
(1)實(shí)際容量的計(jì)算
移液器在標(biāo)準(zhǔn)溫度20℃時(shí)的實(shí)際容量由式(2-3)計(jì)算:
V20=m×Z(t)…………………(2-3)
式中:
V20一標(biāo)準(zhǔn)溫度20℃時(shí)移液器的實(shí)際容量,mL;
m一移液器移取的蒸餾水表觀質(zhì)量,g;
Z--Z因子,由表2-2査得,cm3/g;
t一核查時(shí)蒸餾水的溫度,℃。
表2-2蒸餾水在不同溫度和壓強(qiáng)下的Z因子
(2)容量相對(duì)誤差的計(jì)算
式中:
E--容量相對(duì)誤差,%;
V一標(biāo)稱容量,uL;
3次測(cè)量的算術(shù)平均值,uL;
計(jì)算結(jié)果保留2位有效數(shù)字。
(3)容量重復(fù)性的計(jì)算
計(jì)算公式見下式：
計(jì)算結(jié)果保留2位有效數(shù)字
4.核查結(jié)果判定
不同量程移液器的核査點(diǎn)及其在標(biāo)準(zhǔn)溫度20℃時(shí)的容量允許誤差與重復(fù)性應(yīng)符合JJG646《移液器檢定規(guī)程》要求。單量程、特殊量程移液器參照相應(yīng)核查點(diǎn)進(jìn)行核查。
5.核查結(jié)果處理
如果出現(xiàn)任意核查不符合要求的情況,應(yīng)立刻換人進(jìn)行第二次核查,如第二次核查仍不符合要求,則停止使用該移液器,并加貼紅色停用標(biāo)簽,同時(shí)申請(qǐng)外部計(jì)量檢定。
微量移液器的維護(hù)及保養(yǎng)
1.維護(hù)
(1)移液器不用時(shí),應(yīng)在專用支架上豎直放置。
(2)每天使用前,應(yīng)檢查移液器外表面是否有灰塵和污物,要注意移液器的嘴錐處,只能用70%的酒精溶液清潔。
(3)如液體不小心進(jìn)入活塞室應(yīng)及時(shí)清除污染物。
(4)根據(jù)使用頻率,所有的移液器應(yīng)定期用肥皂水清洗,或用60%的異丙醇消毒,再用雙蒸水清洗并晾干。
(5)移液器使用完畢后,把移液器量程調(diào)至最大值,且將移液器垂直放置在移液器架上。
(6)避免放在溫度較高處以防變形致漏液或不準(zhǔn)。
(7)使用時(shí)要檢查是否有漏液現(xiàn)象。
方法是吸取液體后懸空垂直放置幾秒,看看液面是否下降。如果漏液,原因大致有以下幾方面:
①槍頭是否匹配。
②彈簧活塞是否正常。
③如果是易揮發(fā)的液體(許多有機(jī)溶劑都如此),則可能是飽和蒸汽壓的問題,可以先吸放幾次液體,然后再移液。
2.保養(yǎng)
經(jīng)常使用的移液器,每半年應(yīng)保養(yǎng)一次。從移液器的拆卸開始,步驟如下:
(1)按下管嘴推頂桿,將配置工具的尖端插入推頂桿底部的槽孔中,拔出管嘴推桿軸套和管嘴推頂桿。
(2)用配置專用工具反時(shí)針方向轉(zhuǎn)動(dòng)嘴錐并拆下,拔出柱塞桿。
(3)從嘴錐桿上拆下O型圈。注意5uL~50uL的移液器有兩個(gè)O型圈,可利用柱塞桿的細(xì)端拆下它們。
(4)用一塊干燥無絨布清潔柱塞桿、柱塞彈簧和O型圈,檢查柱塞體是否有灰塵顆粒。
(5)擦凈零件并涂上高真空活栓脂膏,將各零件重新組裝成移液器。
(6)重新檢定。
